实验时间：

2025年03月05日14：50-15：50

实验设备及厂家：

CELLImage Mini全自动活细胞成像仪（联庆瑞奇）、离心机（国产）

实验耗材及厂家：

24孔板（国产）、离心管（国产）、载玻片及盖玻片等

实验试剂：

Calcein-AM/PI双染试剂盒（国产）、去离子水、胰蛋白酶（逸漠生物）、PBS缓冲液（逸漠生物）等

细胞类型：

HELA细胞为例

 

贴壁细胞原位AMPI染色实验方法步骤：（直接在24孔细胞培养板中进行）

 

1.染色前处理：

1.1从低温冰箱内取出10xAssay Buffer，根据单次用量无菌条件取出适量，用去离子水10倍稀释以得到1xAssay Buffer。

1.2将Calcein-AM用1xAssay Buffer按1:500倍稀释；将PI用1xAssay Buffer按1:200倍稀释。

2.细胞处理：

贴壁细胞吸干孔中的培养基，用PBS浸洗2min，重复两次，加入胰蛋白酶消化后，收集细胞，用1xAssay Buffer洗涤细胞，450g离心5min，重复2次，去除残留的胰酶和酯酶。

3.染色步骤：

3.1离心得到细胞沉淀用1xAssay Buffer重悬，细胞密度约3*10^5个/ml。

3.2加入200ul工作浓度的Calcein-AM溶液，染色15-25min；

3.3随后加入200ul工作浓度的PI溶液，染色5min左右。

3.4孵育荧光后的细胞，450g离心5min，去除染色液。

3.5用1X的PBS清洗细胞450g离心5min后，用PBS重悬细胞，取3-5ul滴在洁净的载玻片上，盖上干净的盖玻片。

4.图像采集：

用CELLImage Mini全自动活细胞成像仪观察并进行图像采集。

融合图层效果

5.实验总结：

CELLImage Mini全自动活细胞成像仪不仅能够动态监测细胞实验全程的生长变化信息，揭示细胞杀伤、分裂、迁移等生命活动的细微变化过程，记录实验过程中关键信息，实现动态研究调控物质对细胞的影响；而且支持红绿蓝三通道荧光拍摄，对于一些稳转细胞株构建、监测细胞荧光表达、凋亡监测、荧光染料染色实验帮助极大。活细胞动态监测技术实验全程不耗费人力，所有细胞图像的拍摄记录都可以由设备独立完成，实现全自动，高通量，长期稳定性和低干扰的结合。