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活细胞成像用于感染增强剂对细胞状态影响的监测
细胞转染是外源基因进入真核细胞的一种重要方法。部分外源DNA或RNA通过转染试剂的包装辅助才能顺利进入细胞,发挥相应的作用,进而研究其细胞功能及相应的影响。
通常情况下,助转剂分子内含有许多氨基,在生理PH下会发生质子化,这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面的负电荷,使DNA分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA转移进入细胞,形成内含体(endosome),DNA从内含体释放,进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。通过纳米技术生产出的转染试剂在纳米尺度表现出结合保护DNA能力强、毒性低的独特性能,使其常用于提高细胞转染效率的相关实验。
那么病毒感染增强剂对细胞转染效率提高的同时,对细胞的培养有副作用吗?为了一探究竟,设计了一个简单的实验来验证一下。
实 验 一
分别监测两种细胞在助转剂下的图像变化
病毒感染增强剂的推荐使用浓度,分别培养B16细胞和HBE细胞,用CELLImage全自动活细胞成像系统监测两种条件下两种细胞0~72h的变化差异。
实验一结论
通过CELLImage全自动活细胞成像系统监测两种细胞加入病毒感染增强剂72H后的变化可以发现,加入病毒感染增强剂后,细胞状态会明显变差,由此可见病毒感染增强剂对细胞本身存在较强的毒性。
实 验 二
监测病毒感染增强剂病毒转染荧光图像
用GFP慢病毒10MOI感染B16细胞,用CELLImage全自动活细胞成像系统监测细胞感染病毒72h后荧光表达情况。
实验二结论
通过CELLImage全自动活细胞成像系统监测加入病毒感染增强剂和不加入病毒感染增强剂进行病毒感染72H后的荧光的变化可以发现,加入病毒感染增强剂进行细胞感染效率会得到明显提升,相比于对照组有明显的荧光表达。
实时成像对于监测各种细胞运动和对诸如病毒感染增强剂及其他药物的反应至关重要。特别是,当对细胞处理不同浓度的试剂药物时,由于浓度不同,细胞的反应可能不同,而大量获得每种浓度的图像是费时费力的。CELLImage全自动活细胞成像系统的多定位功能、用户友好型的配套软件的可选性,为高质量实验数据的捕获提供了一种新型的成像方法。