千锤百炼出深⼭，反复试验铸精品！瑞奇公司在产品上市前不断地做各种不同的试验、实验、以求来验证产品的稳定性。

我今天用瑞奇科技的CELLImage Nano活细胞成像仪来做B16细胞培养实验，并运用其Readcells软件进行细胞全过 程监测，现我分享如下：

B16细胞背景概述

B16是小鼠黒色素瘤细胞（简称B16细胞），1954年建立，来源于C57BL/6小鼠的黒色素瘤上皮细胞， 广泛应用于癌症相关研究。通过利⽤B16 细胞可分泌⿊⾊素， 常⽤在⿊⾊素瘤相关研究上，将B16细胞作为研究模型，研究⼈员能够更深⼊地了解癌细胞扩散和在不同⾝体器官增殖的机制。

恶性黒素瘤（malignant melanoma）是由皮肤和其他器官黒素细胞产生的肿瘤。⽪肤⿊素瘤表现为⾊ 素性⽪损在数⽉或数年中发⽣明显改变。虽其发病率 低，但其恶性度⾼，转移发⽣早，死亡率⾼，因此早 期诊断、早期治疗很重要。

本⽂将介绍B16细胞的培养技术，包括培养基的选择、细胞的传代、细胞的冻存和解冻等⽅⾯，以便科 研⼯作者更好地利⽤B16细胞开展相关研究。

B16细胞介绍

图⽚来⾃瑞奇科技实验室

1、来源：⼩⿏⿊⾊素瘤；

2、形态：成纤维细胞样，贴壁⽣⻓；

3、 传代⽐例：1:2 ~ 1:4；

4、换液频率：2~3次/周；

5、倍增时间：48~72h;

6 、 培 养 体 系 ： DMEM （ 高 糖 ）+10%FBS+1%P/S;

7、培养条件：5%CO2;37°C。

B16细胞培养建议

图⽚来⾃瑞奇科技实验室

PART/01、细胞培养特点

1、贴壁性⼀般， 消化时间较短， ⼀分钟左右，注意控制消化时间。

2、细胞⽣⻓较快， 注意控制细胞密度不要过⼤， 细胞密度过⼤则会影响细胞状态， 未及时传代或者换液会出现细胞脱落或状态变差。

3、细胞传代的融合度达到80%（ 就可以进⾏传代， 传代时切勿暴⼒吹打， 避免机械损伤。以下是15%、40%、80%融合度分析图与原图的对⽐。

PART/02、细胞培养注意事项

1、B16细胞推荐的基础培养基是DMEM（⾼糖） 培养基。DMEM养B16 ， 细胞会很⿊， 分泌⿊⾊素量⽐较多（ 下图左管）⽆；⽽1640养⽐较⽩，⿊⾊素分泌量⽐较少（ 下图右管）。（ 依据实验需求可尝试更换培养体系， 更换时建议留种）。

2、B16细胞在DMEM(含1.5g/L NaHCO3)培养基中⽣⻓良好， 市⾯上⼤部分的DMEM 含 有 较 ⾼ 浓 度 的 NaHCO₃（ 3.7g/L ） ， 若 使 ⽤ DMEM（ 3.7g/LNaHCO₃ ） 培养基⽆培养细胞时则需提⾼CO₂浓度（7%-10%）。

3、更换为DMEM培养液培养时， 请保证⾎清和培养液质量， 不然营养问题会导致细胞不⻓、⻓缓慢以及⿊⾊素⼤量分泌。

PART/03、细胞培养过程呈现出的特征

1、B16细胞以梭形或者多边形细胞为主，具有较⾼⽣⻓速度， 表现出较⾼增殖能⼒。

2、细胞质内的⿊⾊素颗粒呈现出棕⿊⾊， 使该细胞在观察时更加醒⽬， 便于观 察， 同时⿊⾊素颗粒可以促进细胞的迁移和侵袭，因此B16细胞具有强⼤的侵袭迁移能⼒和抗凋亡能⼒。

3、B16细胞是⼀种本⾝⽣⻓较快的细胞，当细胞培养⾄细胞80~90%的融合度，即可进⾏分瓶处理，⼀般T25培养瓶建议1:4 传代，每周可传代2~3次。

4、B16细胞在复苏、传代后，如果细胞出现⼀些漂浮状态和细胞碎⽚， 可能是由于细胞状态不佳导致， 可以通过换液得到⽅式去除细胞碎⽚及漂浮的细胞。

5、B16细胞密度低时，生⻓缓慢，接种密度建议启动接种密度：1.0x10 5至5x10 5 活细胞/ml 为宜， 继代培养的接种密度：5.0x10⁴至3.0x10 ⁵活细胞/ml。