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细胞处理办法:接收培养状态的活细胞

2023-12-25

细胞培养技术已经成为当今⽣命科学各领域的基础技术和基本技能,它也是细胞⼯程、基因⼯程和⽣物医学⼯程的重要研究⼿段。那我们在实际的动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求呢?

今天再给⼤家讲讲正确接收培养状态的活细胞的流程吧!购买的细胞收到后如何处理呢?还得分具体是什么类型的细胞。

收到培养状态的活细胞

以接收培养状态的293T细胞为例

01

检查:细胞拿回实验室后,先打开外包装确认培养瓶⽆破损,培养基⽆溢出,若有异常,拍照留证;

若⽆异常,⽤75%酒精擦拭细胞培养瓶表⾯,观察细胞状态,观察细胞⽣⻓状况和有⽆污染现象。

⽤CELLImage Nano成像仪拍摄不同位置细胞的状态图

 

注意:若有任何问题,不要打开盖⼦,拍照留证请⽴即通知细胞实验室。确认⽆明显问题后,因运输问题,细胞会有不同程度影响,先不要打开培养瓶盖,放到培养箱静置 4 ⼩时左右,以便稳定细胞状态。

02

静置完成后,在4X或者10X镜头下对传代或者换液细胞密度和细胞形态进⾏观察,同时给刚收到的进⾏传代或者换液的细胞拍照,(4X,10X)各2-3张以及培养瓶外观照⽚⼀张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。建议购买的细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞⽣⻓状态。

静⽌4⼩时换液后⽤CELLImage Nano成像仪拍摄不同位置的细胞状态

03

若为贴壁细胞:细胞⽣⻓密度超过80%时,根据情况传代,若细胞未超过80%容汇合度时,可对其培养基进⾏半换液处理,即吸弃⼀半的培养基,再加⼊等量的完全培养基继续培养,直⾄细胞密度超过80%以后再进⾏传代。

Readcells分析软件计算出的融合度

位置1:融合度75%(第1张为原图,第2张为融合度图)

位置2:融合度95%(第1张为原图,第2张为融合度图)

位置3:融合度60%(第1张为原图,第2张为融合度图)

以上图⽚均来⾃瑞奇科技实验室

04

若为悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体转移⾄离⼼管,1000RPM 离⼼5分钟,弃去上清液,管底细胞沉淀加⼊1ml 完全培养基吹打、重悬。放⼊新的细胞培养瓶/⽫中培养过夜,根据细胞密度及⽣⻓情况分瓶传代。