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将活细胞成像用于细胞转染实验

2024-05-08

细胞转染是指将外源分子(如DNA,RNA等)导入( 真 核 ) 细 胞 的实验技术之一 , 将目的基因/RNAi基因转染进入细胞、动物组织,并且保持长期稳定的表达,构建稳转细胞系。转染可用于研究细胞过程和疾病分子机制,并且可以作为基因治疗中治疗遗传性遗传疾病的策略,随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。

细胞转染可分为瞬时转染稳定转染,瞬时转染指外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,通常只持续几天,在转染后24-72小时内分析结果,多用于启动子和其他调控元件的分析。稳定转染指外缘DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体存在。通常需要通过一些选择性标记来筛选以得到稳定转染的细胞系。

根据转染方法可分为物理介导、化学介导和生物介导

目前实验室最常用的转染方法为脂质体转染法和电穿孔法。细胞转染常规易操作,但是转染效率却并不一定能符合期望,这是因为细胞转染受到影响的因素多样,如细胞生长状态与密度、培养基、载体大小、转染试剂、抗生素、血清以及氮磷比等。

细胞转染的步骤如下图所示:

为了能实时监测细胞的状态与密度,确定最佳转染时间以及用于后续转染效率,CELLImage全自动活细胞成像仪可以很好地应用于确定细胞转染效率或监测转染的效果。CELLImage全自动活细胞成像仪优化了荧光滤光片和光路,可以以最小的光强实时获得清晰的活细胞明场图像和荧光图像,极大程度地降低细胞光毒性。

慢病毒转染hela细胞应用实例:

通过CELLImage Nano全自动活细胞成像仪在4x物镜绿色荧光通道下,每隔6小时观察转染GFP慢病毒的HeLa 细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况,共计观察时间约72小时。

结果表明绿色荧光蛋白从转染24小时后可见明显荧光表达,72小时后更加明显。