什么是稳定细胞株?

说到稳定细胞株，相信生物行业的用户都有一定的了解，它是蛋白抗体大规模生产的一个重要手段，能够大批量提供高纯度蛋白。但是对于大部分的人来说，稳定细胞株也不过是个名词而已，也仅仅只是知道它是一个抗体制备的手段而已。今天就和大家具体聊聊稳定细胞株，并和大家具体分享一下，构建这么一个系统的意义所在。

稳定细胞株可以从字面来进行理解，就是能够稳定表达蛋白抗体的细胞株。通过以某细胞系构建的持续性过表达或通过干扰某固定基因从而构建成的细胞体系。

为什么要构建稳定细胞株呢?

通过构建稳定细胞株能够有效地降低因为频繁转染所产生的成本，而且能够在目的基因中更好地进行相关研究；

和瞬时转染不同，稳定细胞株不仅能够干扰表达，而且能够更好地去除已表达的目的蛋白；

稳定细胞株可以更好地进行蛋白筛选，同时可以复制适当数量的细胞进行进一步的科学研究；

如何构建稳转细胞株呢？

细胞转染监测

通过细胞转染即慢病毒转染目的细胞后用CELLImage全自动活细胞成像仪观察荧光的表达情况，绿色荧光蛋白从转染24小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。

嘌呤霉素筛选监测

将含适宜浓度嘌呤霉素的培养基加入表达GFP绿色 荧 光 蛋 白 的 细 胞 孔 中 ， 持 续 培 养 24H 。 用CELLImage全自动活细胞成像仪对嘌呤霉素筛选稳转细胞株过程进行监测，培养0~24H能准确知道筛选过程同一视野从开始到结束的细胞连续变化，对细胞变化进行非侵入性的、固定视野的连续记录分析监测。

嘌呤霉素筛选明场及荧光成像变化

CELLImage全自动活细胞成像仪监测图像可以看出，在含有适宜浓度嘌呤霉素的培养基培养24H左右不表达绿色荧光的细胞在嘌呤霉素作用下发生调亡，表达绿色荧光蛋白的细胞能在含有嘌呤霉素的培养基中正常增殖存活。

稳转细胞株的培养

用CELLImage全自动活细胞成像仪对稳转细胞株培养过程进行监测。通过比较同一视野明场及荧光图像，可以判定本次稳转细胞株筛选成功。

稳转细胞株培养48H左右的荧光、明场及荧光明场叠加图层成像

CELLImage全自动活细胞成像仪监测图像可以看出，经过嘌呤霉素筛选后的细胞，能持续稳定表达绿色荧光蛋白。

结 论

构建稳转细胞株，运用CELLImage全自动活细胞成像仪进行抗生素筛选实验实时连续监测，可以非常直观的看到筛选的动态过程，有效的筛选稳定细胞株。该方法相比于传统的细胞株构建方法，既简便又直观，是细胞实验室的不二选择，大家值得拥有！